瑞典阿斯利康公司的生物學(xué)家Marcello Maresca與美國(guó)科學(xué)家J. K Joung合作，在9月12日的Nature Letter上發(fā)文表示，他們?cè)O(shè)計(jì)出了一種可有效規(guī)避CRISPR脫靶效應(yīng)的方案。在小鼠體內(nèi)進(jìn)行的研究表明，利用他們體內(nèi)非靶點(diǎn)驗(yàn)證VIVO 策略（verification of in vivo off-targets）可以穩(wěn)定地鑒定出CRISPR在體內(nèi)全基因組中的脫靶效應(yīng)。
  作為最受關(guān)注的基因編輯“魔剪”，CRISPR技術(shù)顯示了無(wú)限的臨床應(yīng)用潛力，但近兩年來(lái)多項(xiàng)研究卻指出其存在“亂剪”的巨大風(fēng)險(xiǎn)（脫靶效應(yīng)）。一直以來(lái)基于基因比對(duì)的脫靶效應(yīng)預(yù)測(cè)軟件，則不能完全讓人放心。
  J. K Joung團(tuán)隊(duì)于2017年發(fā)明了一種有效檢驗(yàn)CRISPR脫靶效應(yīng)的體外驗(yàn)證方法（Nat. Methods 14, 607–614）。他們以小鼠基因組為研究對(duì)象，在體外將其DNA剪切成片段，每個(gè)片段約包含300個(gè)堿基對(duì)，然后連接adapters使DNA成環(huán)。隨后，他們引入一個(gè)CRISPR-Cas9和引導(dǎo)RNA復(fù)合體，進(jìn)行切割，使其線性化。最后，加入另一種只剪切閉環(huán)DNA的核酸酶用來(lái)降解未被切割的環(huán)狀DNA，體系中就只剩下線性的（即被CRISPR-Cas9切割了的）DNA用于測(cè)序，就可以確定哪些位點(diǎn)被CRISPR-Cas9剪切了。
  Marcello Maresca等將這種體外驗(yàn)證方法的結(jié)論在小鼠體內(nèi)試驗(yàn)中進(jìn)行了驗(yàn)證，發(fā)現(xiàn)脫靶效應(yīng)在體內(nèi)外是高度吻合的。因此，只需要設(shè)計(jì)對(duì)靶點(diǎn)高度特異性的引導(dǎo)RNA，并利用VIVO進(jìn)行驗(yàn)證（沒(méi)有脫靶效應(yīng)），便可以規(guī)避CRISPR脫靶效應(yīng)。
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